اقدامات احتیاطی برای الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید

· پلی آکریل آمیدژل باید توسط مونومر آکریل آمید، پلیمریزاسیون مواد اولیه، کاتالیزور، و حق نمک و مخلوط بافر با هم.

· آکریل آمیدو BIS (N, N'- متیلن دو آکریل آمید) ماتریس ژل شکل مونومر است.

پرسولفات آمونیوم شروع فرآیند پلیمریزاسیون چسب.فرمولاسیون چسب نیاز به محلول 10% پرسولفات آمونیوم تهیه شده در آب دارد.بیشتر اطلاعات نشان دهنده نیاز به استفاده فعال است.با این حال، محلول 10٪ را می توان در دمای 4 درجه سانتیگراد برای چند هفته بدون از دست دادن قابل توجه فعالیت قرار داد.تا 10 میلی لیتر بریزید و وقتی چسب جمع نشد آن را دور بریزید.

نکته: درصد ازآکریل آمیددر توالی یابی چسب و چسب پروتئینی یکسان نیست.در صورت استفاده از محلول آکریل آمید از پیش ساخته شده: BIS، مطمئن شوید که بطری مناسب را تهیه کنید.

· TEMED (N, N, N', N'- tetramethyl ethylenediamine) یک کاتالیزور است که در یک بطری قهوه ای رنگ در یخچال قرار می گیرد.درست قبل از ریختن چسب اضافه کنید.

· الکتروفورز پلی آکریل آمید شیشه های مورد استفاده در الکتروفورز باید قبل و بعد از هر بار شستشو شوند.پس از الکتروفورز، با یک برس نرم و پارچه در آب گرم و صابون بشویید، با آب مقطر بشویید و بگذارید تا خشک شود.

· رطوبت و گرد و غبار می تواند باعث ایجاد پلیمر توخالی شود.قبل از الکتروفورز، صفحه شیشه را با شیشه پاک کن تمیز کرده و با یک برس نرم پاک کنید.با آب مقطر بشویید و با دستمال کاغذی کاملا خشک کنید.شستشو با اتانول 70 درصد قبل از پاک کردن با کاغذ به تمیز کردن و تسریع خشک شدن کمک می کند.نمونه های آکریل آمید را به صورت متوالی اضافه کنید: BIS، آب، محلول بافر، پرسولفات آمونیوم، TEMED.خوب تکان دهید و بلافاصله بریزید.

لازم نیست پلی آکریل آمید قبل از پلیمریزاسیون گاز زدایی شود.(آکریلامید قبلاً برای حذف حباب ها در خلاء قرار می گرفت زیرا اکسیژن مانع از پلیمریزاسیون می شود.)

نکات نمونه نقطه چسب افقی.

یک تکه کاغذ سیاه در جعبه پایینی قرار دهید، پس زمینه مشکی برای ایجاد سوراخ نمونه برای واضح تر دیدن.
· بافر پر از مخزن چسب، درست روی کلوئید.
· اگر لبه چراغ دارد، چراغ ها را روشن کنید، اجازه دهید نور کلوئیدی بتابد.نمونه را داخل پیپت بکشید.
· استفاده از دستگاه پیپتینگ اتوماتیک.
· در 10-200 mu 1 نقطه متحرک مایع را می توان در اکثر نقاط نمونه استفاده کرد.برای سوراخ های نمونه بسیار کوچک (کمتر از 10μ1)، سر پیپت بلند که برای توالی چسب استفاده می شود راحت تر است.

· پیپت کردن فقط در نمونه غوطه ور شده و مایعی که به آرامی در حال حرکت است استنشاق می شود.نمونه ممکن است با گلیسیرین چسبناک به نظر برسد و پمپاژ سریع ممکن است حباب های هوا را به داخل سر پیپت بکشد.

· نمونه ها پس از استنشاق سر پیپت، سر سیال را به آرامی روی لبه لوله حرکت می دهند یا کاغذ پاک کن سر مایع را خارج از قطرات می مکند.مراقب باشید که نمونه مکیده نشود.

نمونه را در سوراخ نمونه قرار دهید

· دستگاه پیپتینگ برای حفظ فشار کمی، نمونه ها را کمی حرکت دهید سر مایع سرریز.
· سر پیپتینگ وارد شده به بافر، کمی بالاتر از سوراخ های نقطه ای، فشار مثبت را حفظ می کند.نوک پیپت را می توان در یک سوراخ کوچک قرار داد.
· به آرامی و پیوسته نمونه ها خارج می شوند.نوک پیپت در بالای سوراخ نمونه نقطه ای قرار می گیرد و نمونه در سوراخ فرو می رود.به جای فشار دادن به داخل، بگذارید نمونه غرق شود تا سوراخ نمونه پر شود.
· پس از آخرین قطره نمونه با سر مایع، مایع به پایه دوم حرکت می کند، به آرامی حرکت مایع را بالا می برد، از بافر خارج می شود.

چگونه نمونه برداری چسب عمودی انجام دهیم؟

· سوراخ های نمونه نقطه چسب عمودی بین دو تکه شیشه تشکیل شده است.در چسب بسیار نازک، سر پیپت را حتی نمی توان بین دو صفحه شیشه ای قرار داد.گلیسیرین را تماشا کنید!سر پیپت را روی سوراخ نمونه قرار دهید تا نمونه در سوراخ فرو رود.
· نمونه نقطه قبل از، مطمئن شوید که برای قرار دادن نقطه عمودی از پلی پروپیلن آسیل ژل سوراخ نمونه تمیز شسته شده است.آکریل آمید پلیمریزه نشده و آبی که ممکن است در انتهای سوراخ نمونه ظاهر شود را بشویید.آب می تواند سوراخ نمونه را به میزان قابل توجهی کوچکتر کند.از یک سرنگ 25 یا 50 میلی لیتری و یک سوزن گیج 18 استفاده کنید.بافر الکتروفورز را داخل آن بریزید و سوراخ نمونه را با دقت بشویید.
· دیدن سوراخ نمونه ممکن است دشوار باشد، اما در عین حال، بقیه آسان است.اگر سوراخ های اضافی وجود داشته باشد، بافر نمونه را می توان با بروموفنول آبی آزمایش کرد.