· پلی آکریل آمیدژل باید توسط مونومر آکریل آمید، ماده اولیه پلیمریزاسیون، کاتالیزور و مقدار مناسبی نمک و مخلوط بافر با هم ترکیب شود.
· آکریل آمیدو BIS (N، N'- متیلن دابل آکریل آمید) ماتریکس ژلی مونومری است.
· آمونیوم پرسولفات فرآیند پلیمریزاسیون چسب را آغاز می‌کند. فرمولاسیون چسب به محلول 10٪ آمونیوم پرسولفات تهیه شده در آب نیاز دارد. بیشتر اطلاعات نشان دهنده نیاز به استفاده فعال است. با این حال، محلول 10٪ را می‌توان به مدت چند هفته در دمای 4 درجه سانتیگراد بدون از دست دادن قابل توجه فعالیت قرار داد. تا 10 میلی لیتر درست کنید و وقتی چسب به هم نچسبید، آن را دور بریزید.
نکته: درصدآکریل آمیددر چسب توالی‌یابی و چسب پروتئینی یکسان نیست. اگر از محلول آماده آکریل آمید: BIS استفاده می‌کنید، حتماً بطری مناسب را تهیه کنید.
· TEMED (N، N، N'، N'- تترامتیل اتیلن دی آمین) یک کاتالیزور است که در یک بطری قهوه‌ای رنگ، در یخچال قرار داده شده است. درست قبل از ریختن چسب، آن را اضافه کنید.
· شیشه مورد استفاده در الکتروفورز پلی آکریل آمید باید قبل و بعد از هر بار الکتروفورز شسته شود. پس از الکتروفورز، با یک برس نرم و پارچه در آب گرم و صابون بشویید، با آب مقطر آبکشی کنید و بگذارید خشک شود.
· رطوبت و گرد و غبار می‌توانند باعث ایجاد پلیمر توخالی شوند. قبل از الکتروفورز، صفحه شیشه‌ای را با شیشه‌شوی تمیز کرده و با یک برس نرم پاک کنید. با آب مقطر بشویید و با دستمال کاغذی کاملاً خشک کنید. شستشو با اتانول 70٪ قبل از پاک کردن با کاغذ به تمیز شدن و سرعت خشک شدن کمک می‌کند. نمونه‌های آکریل آمید را به ترتیب اضافه کنید: BIS، آب، محلول بافر، پرسولفات آمونیوم، TEMED. خوب تکان دهید و بلافاصله بریزید.
لازم نیست قبل از پلیمریزاسیون، پلی‌اکریل‌آمید گاززدایی شود. (قبلاً اکریل‌آمید را در خلاء قرار می‌دادند تا حباب‌ها از بین بروند، زیرا اکسیژن مانع پلیمریزاسیون می‌شود.)
نوک‌های نمونه با نوک چسب افقی.
· یک تکه کاغذ سیاه را در جعبه پایینی، با پس‌زمینه سیاه قرار دهید تا سوراخی برای نمونه ایجاد شود و بتوانید آن را واضح‌تر ببینید.
· بافر پر شده با مخزن چسب، درست بالای کلوئید.
اگر لبه دارای چراغ است، چراغ‌ها را روشن کنید، بگذارید نور به کلوئید بتابد. نمونه را داخل پیپت بکشید.
· با استفاده از دستگاه پیپتینگ خودکار.
· در 10-200 میکرولیتر مایع، می‌توان از نقطه متحرک در بیشتر نقاط روی نمونه استفاده کرد. برای سوراخ‌های نمونه بسیار کوچک (کمتر از 10 میکرولیتر)، سر پیپت بلند که برای چسب توالی استفاده می‌شود، راحت‌تر است.
· پیپت را فقط در نمونه فرو کنید و مایعی را که به آرامی در حال حرکت است استنشاق کنید. نمونه ممکن است با گلیسیرین چسبنده به نظر برسد و پمپاژ سریع ممکن است حباب‌های هوا را به داخل سر پیپت بکشد.
· پس از استنشاق نمونه‌ها، سر پیپت، سر مایع را به آرامی روی لبه لوله حرکت می‌دهد یا با دستمال کاغذی، سر مایع را از قطرات خارج می‌کند. مراقب باشید نمونه را نمالید.
نمونه را داخل سوراخ نمونه قرار دهید
· دستگاه پیپتینگ برای حفظ فشار کم، باعث می‌شود نمونه‌ها کمی سرریز شوند.
· سر پیپت که کمی بالاتر از سوراخ‌های نقطه‌ای در بافر قرار داده شده است، فشار مثبت را حفظ می‌کند. نوک پیپت را می‌توان در یک سوراخ کوچک قرار داد.
· نمونه‌ها را به آرامی و پیوسته خارج کنید. نوک پیپت بالای سوراخ نمونه نقطه‌ای قرار می‌گیرد و نمونه به داخل سوراخ فرو می‌رود. اجازه دهید نمونه به داخل سوراخ فرو رود تا سوراخ نمونه را پر کند، نه اینکه به داخل فشار دهید.
· به محض اینکه آخرین قطره نمونه با سر مایع چکانده شد، مایع به سمت پایه دوم حرکت می‌کند، به آرامی مایع را بالا بیاورید و از بافر خارج کنید.
چگونه نمونه گیری چسب عمودی انجام دهیم؟
· سوراخ‌های نمونه عمودی با نوک چسب که بین دو قطعه شیشه ایجاد شده‌اند. در چسب بسیار رقیق، سر پیپت حتی نمی‌تواند بین دو صفحه شیشه‌ای قرار گیرد. مراقب گلیسیرین باشید! سر پیپت را روی سوراخ نمونه قرار دهید و نمونه به داخل سوراخ فرو می‌رود.
قبل از نمونه‌برداری نقطه‌ای، مطمئن شوید که نقطه عمودی ژل آسیل پلی‌پروپیلن را روی سوراخ نمونه قرار داده‌اید و سوراخ نمونه کاملاً شسته شده است. آکریل آمید پلیمریزه نشده و آبی که ممکن است در انتهای سوراخ نمونه ظاهر شود را بشویید. آب می‌تواند سوراخ نمونه را به طور قابل توجهی کوچک‌تر کند. از یک سرنگ ۲۵ یا ۵۰ میلی‌لیتری و یک سوزن شماره ۱۸ استفاده کنید. بافر الکتروفورز را داخل آن بریزید و سوراخ نمونه را با دقت بشویید.
· دیدن سوراخ نمونه می‌تواند دشوار باشد، اما در عین حال، بقیه کارها آسان است. اگر سوراخ‌های اضافی وجود داشته باشد، می‌توان بافر نمونه را با بروموفنول بلو آزمایش کرد.
زمان ارسال: ۳۱ مارس ۲۰۲۳