اقدامات احتیاطی برای الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید

· پلی آکریل آمیدژل باید توسط مونومر آکریلامید ، مواد اولیه شروع پلیمریزاسیون ، کاتالیزور و سمت راست نمک و مخلوط بافر در کنار هم باشد.

· آکریل آمیدو BIS (N ، N '- متیلن دوتایی آکریلامید) ماتریس ژل فرم مونومر است.

· پرسولفات آمونیوم فرآیند پلیمریزاسیون چسب را شروع می کند. فرمولاسیون چسب نیاز به 10 ٪ محلول پرسولفات آمونیوم تهیه شده در آب دارد. بیشتر اطلاعات حاکی از نیاز به استفاده فعال است. با این حال ، محلول 10 ٪ می تواند برای چند هفته بدون از دست دادن قابل توجه فعالیت در 4 ℃ قرار گیرد. تا 10 میلی لیتر را تشکیل دهید و هنگامی که چسب نتوانسته است جمع شود ، دور شوید.

نکته: درصد ازآکریل آمیددر توالی چسب و چسب پروتئین یکسان نیست. در صورت استفاده از Acrylamide Premade: BIS Solution ، حتماً بطری مناسب را بدست آورید.

· temed (n ، n ، n '، n'- تترامتیل اتیلن دی آمین) یک کاتالیزور است ، در یک بطری قهوه ای ، که در یخچال قرار می گیرد. درست قبل از ریختن چسب اضافه کنید.

· الکتروفورز پلی آکریل آمید شیشه در الکتروفورز باید قبل و بعد از هر بار شسته شود. بعد از الکتروفورز ، با یک برس و پارچه نرم در آب صابون گرم بشویید ، با آب مقطر شستشو داده و خشک شوید.

· رطوبت و گرد و غبار می تواند با پلیمر توخالی ایجاد کند. قبل از الکتروفورز ، صفحه شیشه ای را با تمیز کننده شیشه تمیز کرده و آن را با یک برس نرم پاک کنید. با آب مقطر بشویید و با پاک کردن کاغذ کاملاً خشک کنید. شستشو با 70 ٪ اتانول قبل از پاک کردن با کاغذ به تمیز کردن و سرعت بخشیدن به خشک شدن کمک می کند. نمونه هایی از آکریلامید را به صورت متوالی اضافه کنید: BIS ، آب ، محلول بافر ، پرسولفات آمونیوم ، Temed. خوب تکان دهید و بلافاصله بریزید.

قبل از پلیمریزاسیون ، پلی آکریل آمید را degass لازم نیست. (آکریلامید قبلاً در خلاء قرار می گرفت تا حباب ها را از بین ببرد زیرا اکسیژن پلیمریزاسیون را مهار می کند.)

نکات نمونه نقطه چسب افقی.

· یک تکه کاغذ سیاه را در جعبه پایین ، پس زمینه سیاه قرار دهید تا برخی از سوراخ ها سوراخ کنید تا واضح تر ببینید.
· مخزن چسب پر شده ، دقیقاً بالای کلوئید.
اگر لبه دارای نور است ، چراغ ها را روشن کنید ، بگذارید نور کلوئید را می درخشد. نمونه را درون پیپت بکشید.
· با استفاده از دستگاه پیپتینگ اتوماتیک.
· در 10-200 MU 1 نقطه حرکت مایع در بیشتر نقاط نمونه قابل استفاده است. برای سوراخ های نمونه بسیار کوچک (کمتر از 10μ1) ، سر پیپت بلند که برای توالی چسب استفاده می شود راحت تر است.

· پیپتینگ فقط در نمونه غوطه ور شده و مایعات را به آرامی در حال حرکت است. نمونه ممکن است با گلیسیرین چسبناک به نظر برسد ، و پمپاژ سریع ممکن است حباب هوا را به سر پیپت بکشاند.

· نمونه ها پس از استنشاق سر لوله کشی ، سر سیال را به آرامی در لبه لوله حرکت می کنند یا سر مایع مکنده کاغذ را در خارج از قطرات پاک می کنند. مراقب باشید که نمونه را مکش نکنید.

نمونه را در سوراخ نمونه قرار دهید

· دستگاه پیپتینگ برای فشار کمی ، نمونه ها را کمی حرکت می کند.
· سر پیپ در بافر ، کمی بالاتر از سوراخ های نقطه ، فشار مثبت را حفظ می کند. نوک پیپت را می توان در یک سوراخ کوچک وارد کرد.
· به آرامی و به طور پیوسته نمونه ها را بیرون می کشید. نوک پیپت در بالای سوراخ نمونه نقطه قرار می گیرد و نمونه به داخل سوراخ فرو می رود. اجازه دهید نمونه سینک شود تا سوراخ نمونه به جای فشار آوردن به آن پر شود.
· پس از آخرین قطره نمونه با سر مایع ، مایع به مرحله دوم حرکت می کند ، به آرامی حرکت مایع را بالا می برد ، از بافر خارج می شود

چگونه نمونه گیری چسب عمودی را انجام دهیم؟

سوراخ های نمونه چسب عمودی بین دو قطعه شیشه تشکیل شده است. در چسب بسیار نازک ، سر پیپت حتی نمی تواند بین دو صفحه شیشه ای قرار گیرد. گلیسیرین را تماشا کنید! سر پیپت را روی سوراخ نمونه قرار دهید و نمونه در سوراخ غرق می شود.
قبل از نمونه نقطه ، حتماً نقطه عمودی سوراخ نمونه ژل پلی پروپیلن اسیل را تمیز کنید. آکریلامید غیرمستقیم و آب را که ممکن است در انتهای سوراخ نمونه ظاهر شود ، بشویید. آب می تواند سوراخ نمونه را به میزان قابل توجهی کوچکتر کند. از یک سرنگ 25 میلی لیتر یا 50 میلی لیتر و یک سوزن 18 سنج استفاده کنید. در بافر الکتروفورز بریزید و سوراخ نمونه را با دقت خرد کنید.
· دیدن سوراخ نمونه می تواند دشوار باشد ، اما به همین ترتیب ، بقیه آسان است. اگر سوراخ های اضافی وجود داشته باشد ، بافر نمونه می تواند با آبی برموفنول آزمایش شود.